Орели Ван Тонгелен, Аксель Лорио, Оливье Де Бакер и Шарль Де Смет
Изучение клеточной функции микроРНК требует генетических стратегий для генерации их потери функции. Недавно был предложен новый подход целенаправленной геномной делеции, который основан на индукции сайт-специфических разрезов ДНК с помощью комплексов рибонуклеопротеина Cas9/gRNA в сочетании с гомологичной рекомбинационной-зависимой вставкой кассет, содержащих последовательности для систем Cre-lox или FLP-FRT. Здесь мы предоставляем технический отчет, описывающий применение этой процедуры гомологичной рекомбинации, направленной CRISPR/Cas9, для генерации опухолевых клеток человека, в которых может быть вызван условный нокаут Х-сцепленного кластера микроРНК (miR-105/miR-767). Мы описываем последовательные этапы генной инженерии и отбора клеточных клонов, которые позволили нам генерировать клетки с ожидаемым редактированием генома.