Фармацевтика Аналитика Акта

Абстрактный

Трехмерная система мониторинга сокращения коллагенового геля, использующая свиную трабекулярную сеть для скрининга агентов, снижающих внутриглазное давление

Хироёси Касаи, Мицуэ Исисака, Эйити Сирасава и Хидеаки Хара

Считается, что сократительное состояние трабекулярной сети (ТМ) влияет на отток водянистой влаги и внутриглазное давление (ВГД). Было высказано предположение, что релаксация ТМ может увеличить обычный отток за счет увеличения пористости ткани и привести к снижению ВГД, поэтому она может быть терапевтической целью при глаукоме. Соответственно, мы исследовали влияние различных агентов на сократимость культивируемых клеток свиной трабекулярной сети (ПТС) с использованием трехмерного (3-D) анализа коллагенового геля, чтобы разработать метод скрининга для выявления новых анти-ПТС агентов. Мы идентифицировали клетки ПТС, полученные из глазных яблок свиней, по форме клеток и экспрессии рецепторов липопротеинов низкой плотности (ЛПНП). Клетки ПТС, помещенные в коллагеновые гели, показали сократительную активность, зависящую от концентрации сыворотки плода быка (СБП). Различные ингибиторы киназы, особенно ингибиторы клеточной циклинзависимой киназы (ресковитин), rho и Ca2+-зависимой протеинкиназы (Y-27632), тирозинкиназы (тирфостин AG879), фосфатидилинозитол 3-киназы (бисиндолилмалеимид I, BIM I) и Ca2+/кальмодулин киназы (хелеритрин), сильно ингибировали сокращение коллагенового геля. Это сокращение также ингибировалось этакриновой кислотой, ингибиторами Na+, K+-АТФазы (уабаин), Ca2+-АТФазы (тапсигаргин) и 3-гидрокси-3-метилглутарил кофермента А (HMG-CoA) редуктазы, неселективным ингибитором фосфодиэстеразы (папаверин), а также аденозином А2 (метрифудил) и агонистами каннабиноидных рецепторов (CP-55940). Кроме того, BIM I, симвастатин, BQ-123 и CP-55940 продемонстрировали частичную цитотоксичность. Ингибирующая активность хелеритрина и тапсигаргина также была отнесена к цитотоксичности. Эти результаты показывают, что эта система мониторинга сокращения коллагенового геля in vitro 3-D может быть использована в качестве быстрого и чувствительного метода скрининга для выявления новых агентов, которые вызывают релаксацию клеток pTM, и может одновременно обнаруживать как основные, так и побочные эффекты.