Журнал патологии растений и микробиологии

Абстрактный

Простой, быстрый и эффективный метод выделения РНК вируса мозаики пепино из плодов томата

Амаль Суири, Мустафа Земзами, Хадиджа Хатаби, Хаят Лаатирис, Саид Амзази и Мулай Мустафа Эннаджи

Основной проблемой при молекулярном обнаружении РНК-вирусных патогенов в растениях является достижение хорошего качества извлеченной РНК. Существуют различные методы выделения РНК как из тканей, богатых полисахаридами, так и из тканей с низким содержанием полисахаридов, а также из других невосприимчивых растений. Однако использование методов, требующих много времени и реагентов, а также методов, включающих опасные химикаты, несколько обременительно и проблематично, особенно когда это не является необходимым для конкретных целей, таких как выделение вирусной РНК из плодов томата, отсюда и цель данной статьи. Мы описываем альтернативный, простой и быстрый метод получения вирусной РНК из плодов томата без этапов выделения и очистки РНК, случай вируса мозаики пепино ( PepMV ).

Метод использует механическую обработку и суспендирование в воде. Качество полученной РНК оценивалось по спектрометрическим показаниям и подтверждалось в анализах ОТ-ПЦР. Использованный протокол сравнивался с обычным методом TRIzol. Результаты показали, что выход и качество РНК, полученной с использованием предлагаемого метода, эффективны и высокопроизводительны по сравнению с методом TRIzol. Более того, разработанный метод успешно позволил чувствительно и воспроизводимо обнаруживать предсказанные полосы PepMV в ОТ-ПЦР. Таким образом, молекулярное обнаружение PepMV из плодов томата может проводиться рутинно без кропотливого выделения РНК. Кроме того, это сделает диагностику других РНК-вирусов, заражающих томатные культуры, более простой и менее трудоемкой по сравнению с другими методами, выполняемыми с использованием дорогих коммерческих наборов и методов, включающих токсичные химикаты. Наконец, описанный установленный метод будет эффективно способствовать стратегиям фитосанитарных и сертификационных программ томатных культур во всем мире.