Мале А.С., Като Ф. и Муканкуси КМ.
Современные методы извлечения ДНК из Sclerotium rolfsii используют много опасных органических химикатов для извлечения ДНК высокого качества. Извлечение ДНК еще больше осложняется экзополисахаридами, которые связываются с ДНК, делая ее слизистой. Мы разработали простой и эффективный протокол для извлечения ДНК высокого качества из S. rolfsii. Наш метод использует буфер для извлечения ДНК, содержащий додецилсульфат натрия и протеиназу К для инактивации белков и высокую концентрацию соли для осаждения экзополисахаридов. Он не использует ни фенол, ни хлороформ, ни изоамиловый спирт в процессе извлечения ДНК. Он также не требует сублимационной сушки мицелия и измельчения с использованием жидкого азота. Используя наш метод, из 100 мг мицелия было получено достаточное количество чистой (среднее значение A260: A280 = 1,91 ± 0,001) ДНК (среднее значение = 55,57 ± 0,002 нг/мкл). ДНК поддавалась ПЦР-амплификации с использованием праймеров повторения интер-простой последовательности и праймеров, нацеленных на внутреннюю транскрибированную спейсерную область S. rolfsii. Наш метод будет очень полезен в лабораториях, не имеющих доступа к жидкому азоту и установкам для сублимационной сушки, и станет катализатором для филогенетических исследований этого важного патогена фасоли обыкновенной на основе ПЦР.