Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Новый молекулярно-импринтированный полимер для селективного удаления мешающего гемоглобина перед анализом цельной крови

Тумело Хендрик Табане и Бареки Шима Батлоква

Тяжелый красный глобулярный белок, гемоглобин, отвечающий за красную пигментацию цельной крови, часто мешает идентификации и количественной оценке биомаркеров, связанных с заболеваниями, из цельной крови в области молекулярной диагностики. Основной проблемой является прямое введение цельной крови в качестве образца в анализирующие приборы из-за ее физиологической сложности и «грязной» природы. Например, красный пигмент в цельной крови, который характеризуется как «грязь», обычно ко-элюирует с биомаркерами и маскирует их от легкого хроматографического разделения до их окончательного обнаружения. Он также засоряет компоненты прибора, такие как разделительные колонки, которые, как известно, чувствительны, что приводит к неточным и неточным результатам во время биоанализа. Для решения этих проблем наша лаборатория синтезировала новый, селективный, эффективный и надежный полимер с гемоглобиновым отпечатком в форме порошка посредством объемной свободнорадикальной полимеризации с использованием технологии молекулярного импринтинга для селективного удаления мешающего гемоглобина из образцов цельной крови перед инструментальным анализом биомаркеров, связанных с заболеваниями. Согласно результатам, полимерный порошок эффективно удалял гемоглобин из образца цельной крови, о чем свидетельствует снижение поглощения в ультрафиолетовом и видимом диапазонах с 0,794 Au до более низких значений 0,193 Au до и после нанесения полимерного порошка соответственно. Экспериментально порошок обладал высокой связывающей способностью по отношению к целевому гемоглобину, о чем свидетельствует высокая процентная эффективность удаления 76% из стандартных растворов гемоглобина по сравнению с его низкой связывающей способностью по отношению к аналогичному виду (хлорофиллу) на уровне 32% из стандартных растворов хлорофилла. Кроме того, полимерный порошок оказался надежным, поскольку он удалил помехи гемоглобина из «грязной» сложной матрицы реальных образцов цельной крови человека, удалив до 74% гемоглобина, что было сопоставимо с удалением 76% гемоглобина из чистых стандартов, таким образом, полимерный порошок продемонстрировал, что он может эффективно работать в различных средах чистой и грязной матрицы. Кроме того, полимерный порошок представил себя как эффективный, селективный и неразрушающий инструмент для очистки цельной крови до анализа, который при дальнейших исследованиях может заменить разрушительные и неселективные традиционные стратегии очистки цельной крови, такие как обычно используемое центрифугирование.