Биохимия и аналитическая биохимия

Абстрактный

Защитная пероксидаза из лимона, обладающая способностью обесцвечивать красители и обеспечивающая устойчивость к нагреванию, тяжелым металлам и органическим растворителям

Веда П Пандей, Пракаш К. Бхагат, Рамгопал Праджапати, Ниведита Джайсвал, Свати Сингх, Маника Авасти и Упендра Н Двиведи

Пероксидазы обладают способностью катализировать окислительно-восстановительную реакцию широкого спектра фенольных, а также нефенольных соединений и демонстрируют различные физиологические роли в жизненном цикле растений. С точки зрения промышленного применения пероксидаз, выделение и характеристика пероксидаз, обладающих устойчивостью к более высокому pH и температуре, солям, органическим растворителям, крайне желательны. В этом направлении был выделен и охарактеризован частичный клон кДНК пероксидазы из лимона. Было обнаружено, что пероксидаза связана с защитой, о чем свидетельствует более высокая экспрессия в болезненном состоянии, чем в здоровом состоянии, как на уровне транскрипта, так и на уровне ферментативной активности. Эта защитная пероксидаза из листьев лимона была очищена до гомогенности с использованием быстрых двухэтапных процессов тепловой обработки и аффинной хроматографии . Было обнаружено, что нативная пероксидаза представляет собой гетеротример 200 кДа, состоящий из двух субъединиц по 66 кДа каждая, в то время как одна субъединица составляет 70 кДа. Было обнаружено, что очищенная пероксидаза устойчива к нагреванию (сохраняет 92% активности при 80°C в течение 1 ч) и органическим растворителям, а именно этанолу, метанолу и изопропанолу (сохраняет 30-50% активности в присутствии 50% (об./об.) этих растворителей в течение 1 ч). Очищенная пероксидаза также проявляет толерантность к ионам тяжелых металлов, таким как Cd2 ⁺ , Ni2 ⁺ и Cs2 ⁺ . Было обнаружено, что очищенная лимонная пероксидаза эффективно окисляет промышленные красители в порядке анилиновый синий>метиловый оранжевый> индигокармин>трипановый синий>кристаллический фиолетовый, так что в течение 4 ч наблюдалось обесцвечивание красителя на 40-54%. Таким образом, свойства, проявляемые очищенной лимонной пероксидазой, делают ее перспективным кандидатом на фермент для промышленной эксплуатации.